Cover optimization of b cell elispot assay for the analysis of vaccine

B 細胞在免疫反應中的角色與分類

適應性免疫由 T 細胞與 B 細胞組成，而維持免疫記憶主要由 2 種 B 細胞負責，分別是長壽漿細胞 (long-lived plasma cells) 和記憶 B 細胞 (memory B cells)。長壽漿細胞主要存在骨髓中，可以持續釋放抗體。記憶 B 細胞主要存在外周淋巴系統中，與可以引發的抗原結合時，會分化成分泌抗體細胞 antibody-secreting cells (ASC) 並且擴增。在感染其間或是接種疫苗之後，身體會產生長壽漿細胞和記憶 B 細胞，提供免疫記憶。

傳統常規檢測

常規檢測像是 ELISA，通過檢測血清中的 B 細胞反應來當作抗原特異性抗體的指標，由於不包括記憶 B 細胞 (memory B-cell) 的活性檢測，所以無法涵蓋所有 B 細胞的反應。而記憶 B 細胞的快速分化與產生抗體的能力又與免疫能力高度相關。

1983 年 (Czerkinsky et all) 首次提出使用 ELISPOT 藉由偵測 IgG 的產量來推論 B 細胞活化狀態，IgG 是抗體是人體免疫球蛋白中含量最高的抗體，約佔血液中抗體量的 70~75﹪。之後進一步開發 (Bernasconi et al., 2002, Crotty et al., 2004, Bauer and Jilg, 2006, Vallerskog et al., 2008, Buisman et al., 2009, Cao et al., 2010)，可以在體外刺激有活性的漿細胞與 B 細胞，進而檢測預期免疫反應，可以使用在疫苗發展階段。然而，刺激物的選擇有多種組合，刺激的持續時間可能取決於活化的效力，適當的刺激物有助於提高檢測準確度與縮短實驗時間。

優化流程實驗驗證

研究中使用 R848 + IL-2 當作刺激物，與之前的方法 (刺激物使用 CpG + IL-2 + IL-10 + antigen) 相比， 新方案有以下特點 :

    1. 實驗時間縮短
    2. 靈敏度提高
    3. 所需抗原 (antigen) 更少

建立的方法還使用 5 種疫苗來測試，包括白喉毒素 diphtheria toxin [DT], 破傷風類毒素 tetanus toxoid [TTd], 百日咳毒素 pertussis toxin [PT], 絲狀血凝素 filamentous hemagglutinin [FHA] 和百日咳桿菌素 pertactin [PRN])。都可以成功刺激 B 細胞與漿細胞，獲得免疫反應數值。r

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memory bcell stimpack

Mabtech 原廠資訊

  1. Optimization of a human IgG B-cell ELISpot assay for the analysis of vaccine-induced B-cell responses, 2013, Journal of Immunological Methods https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0022175913000653?via%3Dihub
  2. Optimization and qualification of a memory B-cell ELISpot for the detection of vaccine-induced memory responses in HIV vaccine trials, 2013, J Immunol Methods https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3736720/