” 使用Mabtech StimPacks協助您完成記憶型B細胞的ELISpot/FluoroSpot分析。
” StimPacks已包含在所有B cell ELISpot/FluoroSpot kits中。

 

為了刺激分泌足夠偵測的抗體量，需要多克隆刺激記憶型B細胞。Mabtech廣泛搜索並測試了多種不同的刺激物組合，最終發現R848 (TLR7/8促進劑)搭配IL-2 (重組蛋白)的組合效果最好。因此，推出StimPack: Memory B cells品項！

👉 原廠連結：StimPack: Memory B cells

 

  • R848和IL-2都是免疫刺激物，可刺激B細胞的活化與增殖。
  • R848和IL-2可共同刺激記憶型B細胞成為抗體分泌細胞 (antibody secreting cells, ASCs)，並應用於ELISpot與FluoroSpot的分析中。
R848 合成免疫佐劑，通過toll-like受器7和8 (TLR7/8)活化免疫細胞，包含B細胞。
當R848與TLR7/8結合時，會活化免疫細胞並刺激產生促炎細胞因子、增強免疫反應。
IL-2 由活化的T細胞和NK細胞分泌的細胞因子，在免疫反應中發揮關鍵作用，可促進免疫細胞的活化與增殖。

 

 

接著，將逐步說明在ELISpot/FluoroSpot分析之前該如何刺激PBMC樣本中的記憶型B細胞。

免疫刺激可能需要3至5天，但最佳的反應時間仍依據個別用戶的實驗設計而定。

1 配製rIL-2
    ○ 加入1mL PBS配成1μg/mL濃度，於室溫下至少放置15分鐘。
    ○ Vortex後可立即使用或分裝儲存在-20°C。
2 解凍細胞，於新鮮的培養基中重新懸浮；也可使用新鮮製備的細胞進行實驗。
3 細胞計數並稀釋成2 x 106 cells/mL，將1mL/well的細胞種於無菌平底的24孔盤。
也可以使用無菌管作為替代 (e.g. 5 ml polystyrene round-Bottom Corning tubes, cat. No 352063)。

 

 

4 製備R848和rIL-2混合刺激物，刺激的最終濃度為R848 (1µg/mL)和rIL-2 (10ng/mL)。
    ○ 例如：8孔細胞需準備8mL的混合刺激物。
    ○ 10mL混合刺激物＝20µl R848 (1mg/ml) + 200µl IL-2 (1µg/ml) + 10 ml 完整培養基。
5 每個well加入1mL混合刺激物，周圍空的well填滿無菌水。

 

 

 

6 用鋁箔紙包裹後，於細胞培養箱中培養3至5天。
7 培養完後，重新懸浮細胞並用2X完整培養基清洗。
8 重新懸浮至適用於ELISpot/FluoroSpot分析的細胞數。

 

 

Tips

  • 計算ELISpot/FluoroSpot分析需要多少細胞數，建議刺激至少2倍的細胞數以確保取得足夠檢測的細胞。
  • 如果使用細胞培養盤，應在培養前先確認每個well中的細胞均勻分佈。
  • 培養3至5天後，培養基不應變成黃色。如果變成黃色則表示一開始放的細胞太多，培養基的pH值較低，不利於細胞活性與免疫球蛋白的分泌。

 

 

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