前言

ELISA的偽陽性干擾

你是否曾在ELISA分析結果中看到偽陽性的訊號？利用ELISA分析自體免疫疾病 (autoimmune disease)患者樣本時，時常會受到偽陽性 (false-positive)訊號的干擾。

SARS-CoV-2與血清學檢驗

近年新型冠狀肺炎病毒 (SARS-CoV-2)疫情嚴重，在進行相關學術研究或疫苗開發時，通常藉由血清學檢驗分析免疫反應。慢性炎症 (如：類風溼性關節炎、紅斑性狼瘡等)患者經常接受免疫抑制劑治療，可能使其更容易受到感染，在新冠肺炎流行期間格外受到關注。文獻指出：慢性炎症患者樣本中存在干擾因子，故在進行SARS-CoV-2 血清學檢測時應考慮偽陽性風險 (Kharlamova et al. 2021)。

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自體免疫疾病與干擾因子

● 什麼是干擾因子？

類風濕因子

(RF, rheumatoid factor)

 為多種不同抗體的混合，有些抗體會和其它抗體結合、有些抗體為自體抗體 (與自身體內抗原結合)。

嗜異性抗

(Heterophilic Antibody)

 此抗體會與其它抗體結合，在人類樣本中，可以是與人類免疫球蛋白結合的自體抗體或人抗動物免疫球蛋白的抗體 (human anti-animal immunoglobulin antibodies, HAIA)，包含人抗鼠抗體 (human anti-mouse antibodies, HAMA)。

● 干擾因子影響ELISA分析結果

ELISA雙抗夾心法(又稱三明治法)，以成對抗體捕獲並偵測分析標的物。當樣品中存在標的物時，可偵測陽性訊號 (圖1A)；但當血清或血漿中存在會與分析抗體結合的干擾因子時，則會造成偽陽性訊號，導致定量結果不準確 (Gehin et al. 2021)(圖1B)。由於干擾因子的存在讓特異性與非特異性訊號難以區分，使得分析結果的可信度下降。參考過去文獻，會建議在分析前先利用PEG 6000沉澱或免疫球蛋白抑制劑移除樣本中的抗體 (Bartels et al. 2011, Churchman et al. 2012) 。

ELISA PathRF作用原理與驗證

● RF-block有效阻斷干擾因子

Mabtech新推出的PathRF分析套組可有效消除類風濕因子 (rheumatoid factor)和嗜異性抗體 (heterophilic antibodies)所造成的偽陽性訊號，提高分析結果的可信度。

類風濕因子最初在類風溼性關節炎患者中發現，後續也在癌症、慢性感染、類肉瘤病、混合型結締組織疾病、薛格連氏症候群、全身性紅斑性狼瘡等患者體內檢測到 (Tiwari et al. 2021)。因此，在分析此類患者樣本時，需特別注意類風濕因子和嗜異性抗體所造成的偽陽性訊號 (Kharlamova et al. 2021)。

為確保實驗結果可在不同研究群體 (cohorts)中相互比較，推薦您使用Mabtech的ELISA PathRF (圖1C)！

ELISA PathRF沿用成對抗體的概念來偵測特異性分析標的，加入重組骨架的偵測抗體與特異性RF-block試劑，有效避免干擾因子造成的偽陽性結果。

● 經類風溼性關節炎患者血漿驗證

不成對抗體組合可用來確認ELISA試驗所得到的訊號是為真實或為偽陽性結果，而不成對抗體指的是：捕獲用抗體與偵測用抗體分別結合不同蛋白質，故無法產生真實訊號；如果產生訊號，則顯示樣本中存在部分因子會與抗體相互作用，進而產生偽陽性訊號。

取100位類風溼性關節炎患者的血漿樣本，在不成對抗體ELISA中觀察到高頻率的偽陽性結果 (圖二左)；使用ELISA PathRF的組別則沒有出現偽陽性的訊號 (圖二右)。

Figure 2. Plasma from patients with RA (n=100) was measured in an unmatched ELISA (unmatched set of antibodies against different targets) or with an unmatched ELISA PathRF

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產品資訊

● ELISA PathRF分析標的

可分析人類IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-8 (CXCL8)、IL-10、IL-17A和TNF-α 等標的。

避免偽陽性結果、提高數據可信度，推薦您使用Mabtech ELISA PathRF！

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References

  1. Bartels et al., Rheumatoid factor and its interference with cytokine measurements: problems and solutions, Arthritis 2011
  2. Churchman et al., Multiplexing immunoassays for cytokine detection in the serum of patients with rheumatoid arthritis: lack of sensitivity and interference by rheumatoid factor, Clin Exp Rheumatol 2012
  3. Gehin et al., Rheumatoid factor and falsely elevated results in commercial immunoassays: data from an early arthritis cohort, Rheumatol Int 2021
  4. Kharlamova et al., False Positive Results in SARS-CoV-2 Serological Tests for Samples From Patients With Chronic Inflammatory Diseases, Front Immunol 2021
  5. Tiwari et al., Rheumatoid Factor, Treasure Island (FL): StatPearls Publishing; 2021 Jan