Mabtech FluoroSpot Kit Pre Coated 450

Mabtech FluoroSpot Kit 螢光免疫斑點套組

FluoroSpot 偵測細胞分泌多種細胞因子的聰明方法 Fluorospot 原理和 ELISpot 相同,但是利用螢光為基礎的偵測系統,可以在同一個孔中偵測細胞分泌兩種不同的細胞因子。Fluorospot 特別適合多功能的 T 細胞分析,定義為可以分泌多種細胞因子,和保護預防傳染病例如 HIV 高度相關。

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品牌:Mabtech

原廠介紹 – 原理
原廠介紹
原廠產品列表
應用範圍及方向

FluoroSpot 與 ELISPOT(Enzyme-linked immunospot)原理相同,將最後偵測方式改成螢光。現在已經被廣泛用來偵測細胞分泌的特定反應因子,包括細胞激素(Cytokine)、趨化激素(Chemokine)或是顆粒酵素(Granzyme)。尤其在偵測免疫相關細胞 (B 細胞,T 細胞,Monocytes,macrophages,dendritic cells) 所分泌的抗體或細胞激素,用來分辨免疫細胞亞型。

FluoroSpot 方法操作簡單,靈敏度更高,尤其偵測同一顆細胞同時分泌多種細胞激素時,可各自定量不受干擾。臨床上已經應用在判斷肺結核 ( TB ) 病人為潛伏期或已發病,有相當好的辨識效果。

FluoroSpot Logo

FluoroSpot 除了有 ELISPOT 的偵測敏感度之外,還可以單個樣品進行多種細胞因子的偵測。細胞實驗可以大量且容易執行,適合單次或是大規模的檢測。

Mabtech 提供 FluoroSpot 相關試劑,可以同時偵測兩種或三種細胞因子。

應用範圍

  • COVID-19
  • 疫苗製備
  • 癌症研究
  • 單核球 / 樹突細胞 / 巨噬細胞研究
 
  • 病毒研究
  • 過敏原檢測
  • 疾病研究
  • 預防檢測

應用方向

因 FluoroSpot 可以分析 T 細胞和 B 細胞的功能與數量,且具備了靈敏度更高、檢體使用量更低等特點,因此在多個應用方向中, FluoroSpot 已成為其中的標準分析工具。

文獻選讀

FluoroSpot 優勢

  • 操作簡單:只需放入細胞刺激後,再呈色反應
  • 靈敏度高:可達單顆細胞層級,有利於偵測少量細胞分泌激素
  • 節省時間:可同時偵測兩種以上細胞因子
  • 可大量篩選 : 96well 高通量快速進行實驗
  • 細胞需求量更小:相對於 ELISPOT,需要更少量細胞完成相同分析
  • 接近體內真實狀況:細胞激素一分泌立即被捕獲

FluoroSpot 最多有四色螢光

human il22 ifng il5 il17a fluorospot

excitation 380 nm/emission 430 nm (LED380)
excitation 490 nm/emission 510 nm (LED490, FITC) for 490-reagent detection excitation 550 nm/emission 570 nm (LED550, Cy3) for 550-reagent detection excitation 640 nm/ emission 660 nm (LED640, Cy5) for 640-reagent detection

實驗原理

FluoroSpot 實驗原理和 ELISPOT 相似,差別在最後以螢光方式呈色,再用不同濾鏡分別分析。更可以應用在同時偵測兩個以上細胞因子的分析上。

實驗流程

  1. 披覆抗體
  2. 置入細胞
  3. 抗體標示
  4. 螢光標示
  5. 斑點計數
RS19 fluorospot pic01
RS19 fluorospot pic02

FluoroSpot 分析

Mabtech 已經發展 FluoroSpot 試劑,可以在同一個孔位分析多個細胞因子,靈敏度更高,也更節省細胞用量。

  • 分析多功能 T 細胞在感染、癌症、過敏和自體免疫疾病中的狀況
  • 監測並分辨疫苗所引發的 T 細胞反應,用於疫苗開發中保護確效
  • 分析 T 細胞所分泌的特殊細胞激素 (如 Th1 和 Th17)
  • 決定在過敏或免疫治療中,Th1 / Th2 的反應程度
  • 計數 B 細胞所分泌不同種類專一性抗體 (如 IgG 和 IgA)

T-cell FluoroSpot

FluoroSpot 適合測試特殊 Tcell 的反應。

T 細胞被廣泛應用在研究特別的免疫反應,例如:特異性免疫反應、癌症、過敏和自身免疫性疾病。可用來開發與監控新疫苗和候選疫苗。

FluoroSpot T cell IFN γ
FluoroSpot T cell IL 2
FluoroSpot T cell Overlay

Human IFN-γ/IL-2 dual FluoroSpot

B-cell FluoroSpot

B-cell FluoroSpot 是用來研究抗體免疫反應的強大工具。主要的應用包括偵測 B 細胞對感染和接種引起的反應。可以同時定性與定量細胞分泌的抗體。

FluoroSpot B cell IgG
FluoroSpot B cell IgA
FluoroSpot B cell IgM
FluoroSpot B cell Overlay

Human IgG/IgA/IgM triple FluoroSpot

其他細胞 FluoroSpot

FluoroSpot 適合用於分析樹突細胞 (dendritic cells), 單核細胞 (monocytes), 巨噬細胞 (macrophages)。

FluoroSpot other cell IL 6
FluoroSpot other cell TNF α
FluoroSpot other cell Overlay

Human IL-6/TNF-α dual FluoroSpot

螢光分析

搭配自動化讀盤儀器,可利用濾片來區分不同螢光表現,進而分析。

  • FITC (490/510 nm)
  • Cy3 (550/570 nm)
  • Cy5 (640/660 nm)
  • DAPI
FluoroSpot Analysis

文獻選讀

疫苗開發

2015 Oncoimmunology

Antitumor immunization of mothers delays tumor development in cancer-prone offspring.

G.Barutello et al. 分析動物經由疫苗施打後的 T 細胞和 B 細胞的功能與免疫反應。

G. Barutello et al

癌症研究

2019 Cancers

Human Colorectal Carcinoma Infiltrating B Lymphocytes Are Active Secretors of the Immunoglobulin Isotypes A, G, and M.

C.S. Mullins et al. 分析新鮮切除的原發性和繼發性結直腸癌(CRC)中的浸潤腫瘤 B 細胞 (TiBc) 分泌免疫球蛋白之功能性。

C.S. Mullins et al

疾病診斷

2020 Nature Communications

α-Synuclein-specific T cell reactivity is associated with preclinical and early Parkinson’s disease.

C. S L. Arlehamn et al. 觀察 α-synuclein (α-syn) 特異性 T 細胞和 PD 的相關性,並受試者中 CD4+, CD8+ T 細胞功能與數量,應用於帕金森氏症早期診斷。

C. S L. Arlehamn et al

過敏檢測

2019 Frontiers in Immunology

Variability in German Cockroach Extract Composition Greatly Impacts T Cell Potency in Cockroach-Allergic Donors.

G. Birrueta et al. 分析過敏與非過敏受試者的免疫圖譜變化。

G. Birrueta et al

2019 Clin Exp Allergy

Identification and characterization of a naïve CD8 + T cell repertoire for benzylpenicillin

R. Bechara et al. 利用 IFN‐γ ELISpot 加上 IFN‐γ/Granzyme‐B Fluorospot assays 測試 Granzyme‐B 的分泌,測量 CD8+ T cell 對 BP 的特異性與活性機制。

R. Bechara et al

預防檢測

2018 Immunology Methods

A multicolour HLA-specific B-cell FluoroSpot assay to functionally track circulating HLA-specific memory B cells.

Sergi Luque et al. 在異體器官移植前,評估受捐者器官移植後可能發生排斥反應的機率。

Sergi Luque et al

FluoroSpot kits

 
Contents FluoroSpotFLEX Build your own kit FluoroSpotPLUS Validated pre-coated kits
FluoroSpot plates
Non-coated
Pre-coated plates
Capture mAb(s)
O
In the pre-coated plate
Detection mAb(s)
O
O
Secondary detection ragents conjugated to fluorophores
O
O
Anti-CD3 mAb (positive control)*  
O
Anti-CD28 mAb (for co-stimulation)*
O
O
R848+IL-2 (polyclonal activator)**
O
O
Fluorescence enhancer II
O
O
Size
1 and 10 plates
2 and 10 plates

* Included for certain cytokine analytes

** Included for certain immunoglobulin analytes

原廠文獻查詢
  • R. Bechara et al.(2019). Identification and characterization of a naïve CD8 + T cell repertoire for benzylpenicillin. Clin Exp Allergy. ;49(5):636-643.
  • Barutello et al. (2015) Antitumor immunization of mothers delays tumor development in cancer-prone offspring. OncoImmunology. 4:5, e1005500.​
  • Mullins, C. (2019) ‘Human Colorectal Carcinoma Infiltrating B Lymphocytes Are Active Secretors of the Immunoglobulin Isotypes A, G, and M’. Cancers. 11(6):776.
  • Arlehamn, C. (2020) ‘α-Synuclein-specific T cell reactivity is associated with preclinical and early Parkinson’s disease’. Nat Commun. 11(1):1875.
  • Birrueta, G. (2019) ‘Variability in German Cockroach Extract Composition Greatly Impacts T Cell Potency in Cockroach-Allergic Donors’. Front Immunol. 10: 313.
  • Luque, S. (2018) ‘A multicolour HLA-specific B-cell FluoroSpot assay to functionally track circulating HLA-specific memory B cells’. J Immunol Methods. 462:23-33.