01 Glycan Release

Glycan Release 聚糖釋放

聚糖具有廣泛的生物學功能,近年醣基化生物學研究熱烈,但由於多糖結構複雜,需要選擇穩定性高的醣苷酶,以瞭解醣蛋白的構造活性。Ludger和QA-bio提供多種高穩定性醣苷酶供客戶選擇。

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醣基化作用是真核生物將蛋白轉譯後修飾的重要環節,醣鏈對於蛋白質的結構和功能具有重要的影響,例如:細胞附著、胞內移位或病原菌感染等,藉由剖析醣蛋白的醣基組成也可以進一步了解:

  • 細胞識別、分化
  • 信息傳導
  • 免疫應答
  • 疾病研究(神經退化、感染、腸道)
  • 藥物研究
  • 癌症研究

Workflow:

02 Worklfow

Ludger Glycan Analysis kit 聚醣分析試劑

03 Ludger Products Flowchart

Endoglycosidases 醣苷內切酶

醣基化分析需要進行去醣基化,而醣苷內切酶為目前去醣基化分析中應用最多的酵素,例如:PNGase F、Endo F、Endo H 和 O-Glycosidase等。

示意圖

產品描述

04 PNGase F

PNGase F

  • 釋放所有類型的 N-聚醣(α(1-3)-linked 核心岩藻糖除外)
  • 37˚C 可保持酵素活性至少 96 小時
05 Endo F1

Endo F1

  • 水解含高甘露糖(mannose)或某些雜合型N-linked聚醣
  • 核心岩藻糖會限制Endo F1 活性
06 Endo F2

Endo F2

  • 釋放高甘露糖和選擇性水解雙線型的 N-聚醣
  • 核心岩藻糖會限制Endo F2活性
07 Endo F3

Endo F3 

  • 選擇性水解三線型和岩藻醣基化雙線型 N-聚醣
  • 核心岩藻糖會增加 Endo F3 活性(α(1-3)-linked 除外)
08 Endo H

Endo H

  • 水解含高甘露糖或雜合型 Asparagine-聚醣
  • 無法切割復合型寡醣
  • 去污劑和熱變性可增加某些醣蛋白的裂解速度
09 O Glycosidase

O-Glycosidase  

  • 即内切-α-N-乙醯半乳醣胺酶
  • 催化切割雙線型 Galβ1-3 GalNAC-Thr/Ser的O-聚糖
  • 用於唾液酸、半乳糖、岩藻糖或 N-乙酰葡糖胺時需先使用外切酶處理
10 Endo β Galactosidase

Endo-β-Galactosidase 

  • 從不分支的poly-N-acetyllactosamine 切割β(1-4) 半乳糖鍵結
11 LudgerZyme Ceramide Glycanase Kit

LudgerZyme Ceramide Glycanase Kit 

  • 用於多種鞘醣脂去醣基化 
  • 裂解 ß-糖基鍵

Exoglycosidases 醣苷外切酶

醣苷外切酶是最早作用於醣蛋白的酵素,例如:唾液酸酶、β-半乳糖苷酶、β-N-乙酰氨基葡萄苷酶、α-L-果糖苷酶、α-N-乙酰氨基半乳糖苷酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶等。

  • 從聚醣上切割特定的末端單醣
  • 允許對聚醣進行詳細的結構表徵(單醣類型、連接和序列)

示意圖

產品描述

12 Neuraminidase Au α2 3689

 Neuraminidase Au α(2-3,6,8,9)

  • 從複雜的醣蛋白切割下所有的唾液酸殘基
  • 相對裂解率是:α(2-6) > α(2-3) > α(2-8), α(2-9)
13 Neuraminidase Cp α2 36

Neuraminidase Cp α(2-3,6)

  • 從複雜的碳水化合物與醣蛋白切割下α(2-3) 和 α(2-6)唾液酸殘基
  • 針對未分支唾液酸殘基
14 NeuaminidaseSpα2 3

Neuaminidase Sp α(2-3)

  • 從複雜的碳水化合物和糖蛋白中切割末端 α(2-3) 未分支的唾液酸殘基
  • 針對未分支唾液酸殘基
15 LudgerZymeAcetyl esterase sialate O acetylesterase kit

LudgerZyme Acetyl esterase (sialate-O-acetylesterase) kit

  • 去除通過O-linked 的乙醯基團,特別是9-, 8-, 7-
  • 可用於監測促紅血球生成激素(EPO)產品唾液酸的乙醯化
16 β1 4 galactosidase

β(1-4)-galactosidase

  • 僅從碳水化合物和糖蛋白中釋放 β(1-4) 連接的非還原性末端半乳糖
  • 3 mU 的酵素不到 1 小時可將多達 100 µg 的唾液酸胎球蛋白作用完全
17 β1 346 galactosidase

β(1-3,4,6)-galactosidase

  • 釋放所有 β(1-3,4) 連接的非還原性末端半乳糖
  • β(1-6) 半乳糖以較慢的速度釋放
18 α1 36 galactosidase

α(1-3,6)-galactosidase

  • 從複雜的碳水化合物和醣蛋白中切割 α(1-3) 和 α(1-6) 連接的末端半乳糖基
  • pH 值必須為中性或以上的條件下,去除 α-linked半乳糖特別有效
19 β1 2346 N acetylglucosaminidase

β(1-2,3,4,6)-N-acetylglucosaminidase

  • 從複雜的碳水化合物和醣蛋白切割所有末端 β-linked N-acetylglucosamine 殘基
  • GlcNAc 在不同鍵結的切割率主要取決於相鄰殘基的空間位阻
20 α1 236 mannosidase

α(1-2,3,6)-mannosidase

  • 催化分解 α(1-2,3,6) linked甘露醣
  • 不可切割核心 α(1-6) 甘露糖
21 α16 core mannosidase

α(1,6) core mannosidase

  • 切割無分支的末端甘露醣
22 α1 34 fucosidase

α(1-3,4)-fucosidase

  • 切割分支的末端岩藻醣
  • 將 α(1-3)或α(1-4) 連接到末端 Gal-GlcNAc 二糖的 N-acetylglucosamine
  • 可用於岩藻醣鍵結測定和含路易斯結構的醣蛋白

Deglycosylation kit 去醣基化試劑

Ludger 和 QA-bio 提供了多種試劑組合,讓您在未知醣蛋白基本結構的情況下也能輕鬆操作。

  • 人性化設計的去糖基化試劑盒
  • 去除 N linked和 O linked 聚醣
  • 天然或變性條件皆適用

示意圖

產品描述

23 Enzymatic CarboRelease Kit

Enzymatic CarboRelease Kit

  • 適用於未知聚醣類型
  • 內含多種酵素,在分析設計上具有最大的靈活性
  • 去除所有N-linked 和 O-linked 寡醣
24 Enzymatic DeGlycoMx Kit

Enzymatic DeGlycoMx Kit

  • 適用於未知聚醣類型
  • 只要加入2ul 混合酵素即完成去醣基化
  • 去除所有N-linked 和 O-linked 寡醣
25 Endo F Muti Kit

Endo F Muti-Kit 

  • 天然和變性條件下對 N-linked 聚醣去糖基化
  • 保持聚糖完整,可進一步確定 N-聚醣類型
26 Orela O linked Glycan Release Kit

Orela O-linked Glycan Release Kit 

  • 去除所有O-linked 寡醣
  • 樣本需求量少(最多1mg),且內含多個QC樣品輕鬆分析
  • 釋放後可直接進行螢光標記並分析(HPLC, MS)
  • 比肼解法更快且成本更低
27 Ludger Liberate Hydrazinolysis N and O glycan release kit

Ludger Liberate Hydrazinolysis N- and O-glycan release kit

  • 適用於醣蛋白生物製劑的醣基化分析
  • 釋放所有N-linked和O-linked 寡醣
  • 保留自由末端,可直接進行螢光染色
  • 樣本需求量少(最多1mg),且內含多個QC樣品輕鬆分析
28 Liberate Membrane Glycan Release Kit

Liberate Membrane Glycan Release Kit

  • 固定、清理和 PNGaseF 所介導醣鏈釋放
  • 固定的能力可去除干擾聚醣分析的低分子量溶劑/緩衝液成分,例如海藻糖
  • 可用於 Ludger Velocity 真空歧管系統或其他大多數真空系統

應用分享

疾病研究

2020 Nature Communication

Prominent members of the human gut microbiota express endo-acting O-glycanases to initiate mucin breakdown.

  • 腸道微生物會利用黏蛋白作為營養來源,作者分析微生物的代謝機制可更好地解影響人類消化系統相關疾病的潛在治療措施。
  • 結果顯示內切 O- 聚醣酶於腸道內的作用機制,並於潰瘍性結腸炎組織和結直腸癌細胞產生的黏蛋白發現顯著的寡醣差異,表示具有發展為診斷腸道疾病的檢測工具。
29 疾病研究 2020 Nature Communication

癌症研究

2018 Journal of Allergy and Clinical Immunology

Engineering and stable production of recombinant IgE for cancer immunotherapy and AllergoOncology.

  • AllergoOncology 是癌症免疫學的新興學科,旨在利用過敏相關免疫的特徵來治療腫瘤。作者開發一種可以穩定表達重組IgE 的方法,以應用於癌症治療。
  • 不同培養基會影響細胞分泌抗體的品質,包括轉譯後修飾。作者檢測不同濃度的培養基表達的重組 IgE 需進行聚醣分析,以瞭解其結構及功能性。
30 癌症研究 2018 Journal of Allergy and Clinical Immunology
更多文獻

參考資料

  • Crouch, L.I., Liberato, M.V., Urbanowicz, P.A. et al. Prominent members of the human gut microbiota express endo-acting O-glycanases to initiate mucin breakdown. Nat Commun 11, 4017 (2020). https://doi.org/10.1038/s41467-020-17847-5
  • Crescioli, S., Chiaruttini, G., Mele, S., Ilieva, K. M., Pellizzari, G., Spencer, D., Gardner, R. A., Lacy, K. E., Spicer, J. F., Tutt, A., Wagner, G. K., & Karagiannis, S. N. (2018). Engineering and stable production of recombinant IgE for cancer immunotherapy and AllergoOncology. The Journal of allergy and clinical immunology, 141(4), 1519–1523.e9. https://doi.org/10.1016/j.jaci.2017.12.986