專案描述

基因編程服務 Gene Editing Service

REPROCELL 與 GenAhead Bio 共同開發的智能基因修飾工具 – CRISPR-SNIPER,經過多次優化測試,即使不易修飾的細胞類型 (例如 iPSC)也可執行基因編程。

CRISPR-SNIPER 為優化後的基因編輯技術,結合 CRISPR-Cas 系統與 SNIPER 高靈敏的篩選技術,提高了基因編程的成功率,節省實驗過程中的時間、人力與金錢成本。

SNIPER 篩選技術

結合不同培養條件的多孔盤與高靈敏的 digital PCR,在連續稀釋之前新增預篩選步驟,提早辨別基因編輯成功率最大的克隆 (clones)。預篩選後再進行連續稀釋、挑選克隆與定序,此工作流程中大幅降低所需挑選的克隆數 (平均約 50 clones),花費的時間更短、基因編輯的成功率也更高。

↑ 先以 digital PCR 篩選出基因編輯成功的 gRNA,再進行稀釋並挑選目標克隆。

↑ 與其他基因編輯服務相比,REPROCELL 除了提供多種 gRNA 選擇,還會進行多種試驗以優化質體設計。

CRISPR-SNIPER 可滿足多種且複雜的基因編輯需求

CRISPR-SNIPER 適用各種細胞類型,尤其是 iPSC、貼附型和懸浮型癌細胞。

應用範圍廣,包含:癌症研究、建立動物疾病模型、免疫治療 CAR-T 等。

√ 可插入大基因片段(Insert large gene fragment)

最多可插入 7kbp的功能性基因片段,例如: iPSC 插入 GFP 基因,可追蹤細胞分化型態。

√ 插入雙等位基因 (Insert biallelic mutations)

達到純合子或雜合子突變,確實表現不同的疾病表型。

√ 增加修飾效率 (Increasing screening efficiency)

和傳統技術相比,SNP 修飾成功率增加了30倍。

√ 一次編輯多個基因 (Editing multiple gene at once)

評估每個 gRNA的效能,單次實驗即可完成多個基因突變的模型。

√ 解決修飾的瓶頸 (Solving challenge modification)

增加篩選的靈敏度,克服過去基因編輯的瓶頸,例如:SNP、大片段基因、功能性的基因修飾。

√ 更精準的基因編輯 (Achieving more accurate gene editing)

可編輯高度同源性的GOI,例如:HLA-A與HLA-B。

REPROCELL 提供客製化且靈活的基因編輯套組

Design and Feasibility study:

客戶提供目標基因和位點,REPROCELL 可協助優化並篩選最佳培養條件,最後提供 bulk clone。

Full Package Service:

提供用戶完整的基因編輯方案,包含最初的實驗設計、可行性套件與後續的細胞篩選、編輯特徵和細胞擴增條件,最後提供基因編輯後的細胞株。

實際案例

建立阿茲海默症 (Alzheimer’s disease, AD)神經元疾病模型

先利用 CRISPR-SNIPER 對 iPSC 進行 AD 相關的 PS1 基因編輯,再以視黃醇誘導三組 iPSC 分化成神經幹細胞,染色後比較神經突長度和密度。

①  健康者 iPSC (wt)

② CRISPR-SNIPER 編輯PS1突變的iPSC

③ AD 患者 PS2 突變的iPSC